A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram (1853 - 1838), em 1884 e que consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com reagentes.
Uma bactéria GRAM+ possui uma parede celular rica em Ac teicóico e peptídeo glicano. Após se corar com o cristalvioleta, o álcool/acetona irá desidratar a parede de peptideoglicano e fechar a malha, prendendo ocorante(cristal violeta+lugol). Sendo assim, ao visualizar no microscópio ela terá coloração azul violáceo.
Já na bacteria GRAM-, o álcool/cetona irá remover a membrana externa rica em lipopolissacarídeos(lipideo+sacarídeos) e restará a camada de de peptideoglicano que irá se corar com a fucsina. Por isso, ao visualizar no microscópio terá coloração rosa pink para vermelho.
Por outro lado, resultados do tipo "falso Gram-positivo" serão obtidos se o tratamento com etanol-acetona for omitido. O solvente não removerá o corante cristal violeta, ou seja, não irá descolorir a bactéria o que irá alterar o resultado da coloração.
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